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Monogalactopiranósidos de fluoresceína y éster metílico de fluoresceína: síntesis, hidrólisis enzimática por β-galactosidasa biotinilada y determinación del coeficiente de difusión traslacional

Los monoglucósidos de fluoresceína (d-galactopiranósido (FMG) y d-glucopiranósido) y su éster metílico (MFMG) se han preparado a partir de acetobromoglucosa/galactosa y éster metílico de fluoresceína con buenos rendimientos.Se realizaron experimentos de hidrólisis enzimática (usando β-galactosidasa biotinilada) de los derivados de galacto y se calcularon los parámetros cinéticos.Se ha observado un aumento de 15 a 20 veces de la intensidad de la fluorescencia durante la hidrólisis.Se ha observado un aumento lineal de la fluorescencia a corto tiempo y baja concentración de sustrato, lo que convierte a estos compuestos en sondas útiles y sensibles para las galactosidasas.La magnitud del valor de la constante de Michaelis-Menten (Km) para MFMG es mayor que la de FMG, lo que sugiere un posible cambio conformacional del sustrato fluorogénico.El valor de Km para la β-Gal biotinilada con FMG es inferior al de la enzima nativa.Esta observación indica una mayor afinidad por el sustrato de la enzima biotinilada en comparación con la enzima nativa.Se han medido los coeficientes de difusión traslacional, tanto para sustratos fluorogénicos como para ambos productos, empleando espectroscopía de correlación de fluorescencia.Se ha medido que los coeficientes de difusión traslacional para los sustratos fluorogénicos y los productos de hidrólisis enzimática son similares, en el rango de 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Por lo tanto, no es tan evidente una mejora o un retraso de la cinética enzimática debido a la diferencia en la movilidad de traslación del sustrato y el producto.