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Información mecanicista sobre una familia de alfa-manosidasas dependientes de Ca2+ en un simbionte intestinal humano.

Las bacterias del colon, ejemplificadas por Bacteroides thetaiotaomicron, desempeñan un papel clave en el mantenimiento de la salud humana al aprovechar grandes familias de glucósidos hidrolasas (GH) para explotar los polisacáridos de la dieta y los glucanos del huésped como nutrientes.Tal expansión de la familia GH está ejemplificada por las glucosidasas GH92 de la familia 23 codificadas por el genoma de B. thetaiotaomicron.Aquí mostramos que se trata de alfa-manosidasas que actúan a través de un único mecanismo de desplazamiento para utilizar los N-glucanos del huésped.La estructura tridimensional de dos manosidasas GH92 define una familia de proteínas de dos dominios en las que el centro catalítico se encuentra en la interfaz del dominio, proporcionando asistencia ácida (glutamato) y básica (aspartato) para la hidrólisis en un Ca(2+)- manera dependiente.Las estructuras tridimensionales de los GH92 en complejo con inhibidores brindan información sobre la especificidad, el mecanismo y el itinerario conformacional de la catálisis.Ca(2+) juega un papel catalítico clave al ayudar a distorsionar el manósido lejos de su conformación de silla de estado fundamental (4)C(1) hacia el estado de transición. (Bibliografía: Nat.químicaBiol.6, 125-32, (2010）

Cromatografía de afinidad frontal de glicoasparaginas de ovoalbúmina en una columna de concanavalina A-sefarosa.Un estudio cuantitativo de la especificidad de unión de la lectina.

Las interacciones de la concanavalina A (ConA) inmovilizada con Sepharose 4B con 10 glicoasparaginas derivadas de ovoalbúmina se investigaron cuantitativamente mediante cromatografía de afinidad frontal.En este método, se aplica continuamente una solución de carbohidratos a una columna de ConA-Sepharose y se mide el retardo del frente de elución como parámetro de la fuerza de la interacción.Se puede determinar la constante de disociación (Kd) para cada sacárido con ConA.Un análisis de la unión de p-nitrofenil-alfa,D-manósido ha demostrado que las propiedades de unión de ConA no cambian esencialmente después de la inmovilización en Sepharose 4B.Cada una de las glicoasparaginas de ovoalbúmina se marcó con tritio mediante el método de metilación reductora para su análisis.Una comparación de los valores de Kd obtenidos mostró que la unión de ConA varía considerablemente con diferencias estructurales muy ligeras de la cadena de glucosilo.Los resultados sugieren que ConA reconoce una estructura de cadena de glucosilo específica, Man alfa 1-6 (Man alfa 1-3) Man, en la que al menos un grupo hidroxilo en la posición C-3 de la manosa unida a C-6 debería estar libre.