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Mycobacterium tuberculosis puede persistir durante décadas en el huésped humano.Se cree que las vías de respuesta estrictas que involucran al polifosfato inorgánico [poli(P)], que es sintetizado e hidrolizado por la polifosfato quinasa (PPK) y la exopolifosfatasa (PPX), respectivamente, desempeñan un papel regulador clave en la persistencia bacteriana.Mostramos aquí que la acumulación de poli (P) de M. tuberculosis está temporalmente vinculada a la restricción del crecimiento bacilar.También identificamos M. tuberculosis Rv1026 como una nueva exopolifosfatasa con actividad hidrolítica contra poli(P) de cadena larga.Usando un sistema de expresión inducible por tetraciclina para eliminar la expresión de Rv1026 (ppx2), descubrimos que la acumulación de poli(P) de M. tuberculosis conduce a un crecimiento más lento y una menor susceptibilidad a la isoniazida, una mayor resistencia al calor y al pH ácido, y una mayor supervivencia intracelular durante la infección por macrófagos.Mediante microscopía electrónica de transmisión, la cepa de eliminación de ppx2 exhibió un mayor grosor de la pared celular, que se asoció con una menor permeabilidad de la pared celular a los fármacos hidrofílicos en lugar de la inducción de bombas de salida de fármacos o la formación alterada de biopelículas en relación con el control de vector vacío.El análisis transcriptómico y metabolómico reveló una reducción metabólica de la caída de ppx2 caracterizada por una transcripción y traducción reducidas y una reducción de los niveles de glicerol-3-fosfato.En resumen, el poli(P) juega un papel importante en la restricción del crecimiento y el cambio metabólico de M. tuberculosis y contribuye a la tolerancia a los antibióticos mediante la alteración de la permeabilidad de la pared celular. La respuesta estricta, que involucra a las moléculas reguladoras polifosfato inorgánico [poli(P)] y (p )ppGpp, se cree que media la persistencia de Mycobacterium tuberculosis.En este estudio, identificamos una nueva enzima (Rv1026, PPX2) responsable de hidrolizar poli(P) de cadena larga.Una cepa de M. tuberculosis modificada genéticamente deficiente en el gen ppx2 mostró niveles elevados de poli(P), que se asociaron con una detención temprana del crecimiento bacteriano y una susceptibilidad reducida al fármaco de primera línea isoniazida, así como una mayor supervivencia bacteriana durante la exposición al estrés. condiciones y dentro de los macrófagos.En relación con la cepa de control, el mutante mostró un mayor grosor de la pared celular y una menor permeabilidad al fármaco.La expresión génica global y el análisis de metabolitos revelaron una expresión reducida de la maquinaria transcripcional y traduccional y un cambio en la utilización de la fuente de carbono.En resumen, la regulación del equilibrio poli(P) es fundamental para la formación persistente en M. tuberculosis.