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1. Los métodos de perfilado de metabolitos son herramientas importantes para la medición de reservas de metabolitos en sistemas biológicos.Si bien la mayoría de los métodos de perfilado de metabolitos informan intensidades relativas o dependen de algunos estándares internos que representan todos los metabolitos, el requisito final para una descripción cuantitativa del conjunto de metabolitos en células y fluidos biológicos es la determinación de la concentración absoluta.Presentamos aquí un método de perfilado de metabolitos específicos de cromatografía de gases/espectrometría de masas en tándem (GC/MS/MS) sensible y de alto rendimiento que permite la cuantificación absoluta de todos los metabolitos detectados.El método se basa en la derivatización y cuantificación del cloroformiato de metilo añadiendo muestras con estándares de metabolitos derivatizados por separado con reactivos de derivatización deuterados.La ionización por impacto de electrones tradicional se reemplaza por la ionización química positiva, ya que esta última conserva en mayor medida el ion molecular y otros fragmentos de alto peso molecular.Esto facilitó la selección de transiciones MS/MS únicas entre los muchos metabolitos coeluyentes.Actualmente, el nuevo método GC/MS/MS comprende 67 metabolitos primarios comunes, de los cuales la mayoría pertenece a los grupos de ácidos orgánicos amino y no amino.Mostramos la aplicabilidad del método en muestras de orina y suero.El método es una mejora significativa de la metodología actual para el perfilado cuantitativo de metabolitos de GC/MS de aminoácidos y ácidos orgánicos no amino.

El 2.24S-hidroxicolesterol (24OHC) y el 27-hidroxicolesterol (27OHC) son dos oxiesteroles estructuralmente similares de diferentes orígenes: el primero se forma casi exclusivamente en el cerebro y el segundo se forma en menor medida en el cerebro que en la mayoría de los demás órganos.HIPÓTESIS A SER PROBADA: El daño neuronal y/o la desmielinización causan un aumento del flujo de 24OHC desde el cerebro hacia el líquido cefalorraquídeo (LCR), mientras que una barrera hematoencefálica defectuosa provoca un aumento del flujo de 27OHC desde la circulación hacia el LCR. Masa de dilución de isótopos Se utilizó espectrometría para analizar los dos oxiesteroles en LCR y plasma de más de 250 pacientes con diferentes enfermedades neurológicas y geriátricas. Los niveles de LCR de los dos oxisteroles se vieron mucho más afectados por las diferentes enfermedades que los niveles plasmáticos.Los pacientes con enfermedades desmielinizantes activas tenían niveles elevados de 24OHC en LCR con una relación 24OHC/27OHC relativamente alta.Los pacientes con meningitis en general tenían niveles elevados de ambos esteroides con una relación 24OHC/27OHC baja.Los pacientes con enfermedad de Alzheimer tenían niveles ligeramente elevados de 24OHC en LCR con un aumento menor de 27OHC.Los pacientes con esclerosis múltiple tenían una tendencia a tener niveles más altos de 24OHC durante los períodos activos con una proporción alta de 24OHC/27OHC. Las mediciones de los dos oxiesteroles en LCR y plasma pueden contribuir significativamente a los métodos bioquímicos existentes para la evaluación de enfermedades neurológicas.