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Efectos de los detergentes sobre la actividad atpasa de la glicoproteína P: diferencias en las perturbaciones de las actividades basales y dependientes de verapamilo.

La glicoproteína P (P-gp), una glicoproteína de la membrana plasmática asociada con el fenotipo de resistencia a múltiples fármacos, es responsable del flujo de salida dependiente de ATP de varios fármacos anfifílicos.Utilizando vesículas de membrana preparadas a partir de la línea celular resistente a múltiples fármacos DC-3F/ADX, estudiamos la perturbación de las actividades P-gp ATPasa basal (es decir, en ausencia de fármaco) y dependiente de verapamilo inducidas por varios detergentes, en niveles no solubilizantes, así como a concentraciones solubilizantes.La solubilización progresiva de la membrana con el aumento de la concentración de detergente se controló mediante experimentos de dispersión de luz y centrifugación.Para las concentraciones de detergente no solubilizante, todos los detergentes probados excepto el DOC indujeron una inhibición parcial de la actividad ATPasa de P-gp, que no se correlacionó con la cantidad de los diversos detergentes probados incorporados en las membranas.El análisis de la activación de la P-gp inducida por verapamilo revela que la actividad de la ATPasa de la P-gp está modulada de manera diferente por los diversos detergentes a concentraciones no solubilizantes.Por lo tanto, es más probable que ocurran interacciones específicas entre P-gp y detergentes en lugar de una perturbación global de la membrana.Después de la solubilización por los diversos detergentes probados, la actividad P-gp ATPasa basal se inhibió virtualmente por completo, excepto en presencia de CHAPS que pudo preservar esta actividad a un nivel comparable al medido en membranas nativas.Sin embargo, la activación de P-gp ATPasa inducida por verapamilo se perdió durante la solubilización de P-gp por CHAPS, pero se recuperó después de la dilución de CHAPS por debajo de su concentración micelar crítica.Estas observaciones indican interacciones específicas entre las moléculas P-gp y CHAPS dentro de las micelas mixtas.En general, nuestros datos que evidencian interacciones específicas P-gp/detergentes son consistentes con la ubicación de los sitios de transporte de fármacos en los dominios transmembrana de P-gp.