Productos

Las serina/treonina proteína fosfatasas se han descrito en muchas bacterias patógenas como enzimas esenciales involucradas en las vías de transducción de señales dependientes de la fosforilación y frecuentemente asociadas con la virulencia de estos organismos.Una inspección del genoma de Mycoplasma synoviae reveló la presencia de un gen (prpC) que codifica una supuesta proteína fosfatasa de la subfamilia de proteína fosfatasa 2C (PP2C).Aquí, informamos una caracterización bioquímica completa de M. synoviae fosfatasa (PrpC) y el papel particular de los iones metálicos en la relación estructura-función de esta enzima.El análisis de la secuencia de aminoácidos de PrpC reveló que todos los residuos involucrados en el centro de metal dinuclear y los residuos putativos de coordinación de iones de tercer metal, conservados en fosfatasas PP2C, están presentes en PrpC.PrpC es una proteína monomérica capaz de desfosforilar sustratos fosforilados con dependencia de iones Mn(2+).El análisis de estabilidad térmica demostró la estabilidad de la enzima a temperaturas suaves y la influencia de los iones Mn(2+) en esta propiedad.El análisis de espectrometría de masas sugirió que tres iones metálicos se unen a PrpC, dos de los cuales con una aparente constante de alta afinidad.El análisis mutacional de los supuestos residuos de coordinación del tercer metal, Asp122 y Arg164, reveló que estas variantes exhibían una unión más débil de los iones de manganeso y que ambas mutaciones afectaban a la actividad de la fosfatasa PrpC.De acuerdo con estos resultados, PrpC es un miembro de la proteína fosfatasa dependiente de metales con una estabilidad mejorada en la forma holo y con Asp122, posiblemente implicado en el tercer sitio de unión al metal, esencial para la actividad catalítica.