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Recientemente se han planteado preguntas con frecuencia: 1. ¿Por qué se puede usar la prueba ONPG para distinguir la fermentación retardada de lactosa?2. ¿Por qué la norma nacional establece que es necesario usar trisacárido de hierro con cloruro de sodio al 3% (o trisacárido de hierro) para la prueba de ONPG?3. Para Vibrio parahaemolyticus, al realizar la prueba OPNG, ¿por qué se debe agregar tolueno gota a gota de acuerdo con el estándar?¿Cuál es la función?

Nuestra empresa revisó mucha información, la resumió y la compartió con usted a continuación:

Principio: El nombre chino de ONPG es o-nitrobenceno-β-D-galactopiranósido.ONPG puede hidrolizarse en galactosa y o-nitrofenol amarillo (ONP) por β-galactosidasa, por lo que la actividad de β-galactosidasa puede detectarse por el cambio de color del medio de cultivo.

La lactosa es un azúcar que la mayoría de los microorganismos necesitan detectar.Su metabolismo requiere dos enzimas, una es la permeasa celular, la lactosa ingresa a las células bajo la acción de la permeasa;el otro es la β-galactosidasa, que hidroliza la lactosa en galactosa.Lactosa y glucosa.La β-galactosidasa también puede actuar directamente sobre la ONPG para hidrolizarla en galactosa y o-nitrofenol amarillo (ONP).Se puede hacer en 24h, incluso con fermentadores retardados de lactosa.Por lo tanto, explica los resultados de la observación de recoger el cultivo 1 del agar inclinado e inocularlo en un círculo completo a 36 °C durante 1-3 horas y 24 horas.Si se produce β-galactosidasa, se volverá amarilla en 1-3 h, si no hay tal enzima, no cambiará de color en 24 h.

De acuerdo con las dos enzimas anteriores, los microorganismos se pueden dividir en las siguientes categorías:

1 bacteria fermentadora de lactosa (18-24 horas) con permeasa y β-galactosidasa P+G+;

2 Fermentadores de lactosa retardados (más de 24 horas) que carecen de permeasa pero que poseen galactosidasa: P- G+.

3 Fermentadores sin lactosa que carecen tanto de permeasa como de galactosidasa: P- G-.

La prueba ONPG se puede utilizar para distinguir las bacterias fermentadoras de lactosa (P-G+) de las bacterias no fermentadoras de lactosa (PG-), tales como:

1 Diferenciar los fermentadores tardíos de lactosa (P- G+) de los no fermentadores de lactosa (P- G-).

(a) Citrobacter (+) y Salmonella arizonae (+) de Salmonella (-).

(b) Escherichia coli (+) de Shigella sonnei (-).

¿Por qué se realizó el ensayo ONPG utilizando un cultivo durante la noche en trisacárido férrico (trisacárido de hierro) con cloruro de sodio al 3 %?Nuestra empresa ha consultado mucha información, pero no hay un comunicado claro.Solo en el sitio web de la FDA está escrito que "Inocule los cultivos que se probarán en agar de hierro con azúcar triple inclinado e incube durante 18 h a 37 ° C (u otra temperatura adecuada, si es necesario). También se puede usar % de lactosa".significa: las bacterias de prueba se inocularon en el medio de hierro trisacárido y se cultivaron a 37 ° C durante 18 h.También son aceptables los medios inclinados de agar nutritivo (u otro) que contengan 1% de lactosa.Por lo tanto, se infiere que el medio de hierro trisacárido contiene lactosa.Después del crecimiento durante la noche, las bacterias han producido una buena β-galactosidasa activa.Usando tales bacterias, la β-galactosidasa puede descomponer ONPG más rápido.El fenómeno experimental es más rápido y se manifiesta mejor.Además, la adición gota a gota de tolueno y un baño de agua durante 5 min son todos para liberar completamente la β-galactosidasa.