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Al igual que otros virus de ARN de cadena positiva, los tombusvirus se replican mediante el complejo de replicasa viral unido a la membrana (VRC).El VRC consta de la polimerasa de ARN dependiente de ARN codificada por virus p92 (RdRp), la chaperona de ARN p33 viral y varias proteínas huésped cooptadas.Para convertirse en un RdRp funcional después de su traducción, la proteína de replicación p92 debe incorporarse al VRC, seguido de su activación.Hemos demostrado previamente en un ensayo basado en extracto de levadura libre de células que la activación del RdRp del virus del acrobacia arbustiva del tomate (TBSV) requiere uno o varios factores solubles del huésped.En este artículo, identificamos la proteína de choque térmico celular 70 (Hsp70) como el factor huésped cooptado requerido para la activación de un TBSV RdRp recombinante truncado en el extremo N.Además, el bloqueo de la función Hsp70 basado en moléculas pequeñas inhibe la síntesis de ARN por parte del tombusvirus RdRp in vitro.Además, mostramos que los fosfolípidos neutros, a saber, la fosfatidiletanolamina (PE) y la fosfatidilcolina (PC), mejoran la activación de RdRp in vitro.Por el contrario, el fosfatidilglicerol (PG) muestra un efecto inhibidor fuerte y dominante sobre la activación de RdRp in vitro.También demostramos que PE y PC estimulan la interacción RdRp-ARN viral de cadena positiva [(+)ARN], mientras que PG inhibe la unión del ARN viral a RdRp.Con base en los roles estimulantes versus inhibidores de varios fosfolípidos en la activación de RdRp de tombusvirus, proponemos que los tombusvirus podrían utilizar la composición lipídica de las membranas subcelulares específicas para regular el nuevo ensamblaje de VRC durante el curso de la infección. La polimerasa de ARN dependiente de ARN codificada por virus (RdRp), que es responsable de sintetizar la progenie de ARN viral en células infectadas de varios virus de ARN de cadena positiva, inicialmente está inactivo.Es probable que esta estrategia evite la síntesis de ARN viral en el citosol que conduciría rápidamente a la inducción de respuestas antivirales celulares desencadenadas por ARN.Durante el ensamblaje del complejo de replicasa unido a la membrana, el RdRp viral se activa a través de un proceso que no se comprende del todo y que hace que el RdRp sea capaz de sintetizar ARN.Mediante el uso de TBSV RdRp, mostramos que la chaperona Hsp70 celular cooptada y los fosfolípidos neutros facilitan la activación de RdRp in vitro.Por el contrario, el fosfatidilglicerol (PG) tiene un efecto inhibitorio dominante sobre la activación in vitro de RdRp y la interacción RdRp-ARN viral, lo que sugiere que el microdominio membranoso que rodea a RdRp afecta en gran medida su capacidad para la síntesis de ARN.Por lo tanto, la activación de la RdRp viral probablemente depende de múltiples componentes del huésped en las células infectadas.