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Las estructuras cristalinas de los complejos de carboxipeptidasa T (CpT) con análogos de sustrato de fenilalanina y arginina (ácido bencilsuccínico y ácido (2-guanidinoetilmercapto) succínico) se determinaron mediante el método de reemplazo molecular a resoluciones de 1,57 Å y 1,62 Å para aclarar el amplio perfil de especificidad del sustrato. de la enzimaSe demostró que los residuos conservadores Leu211 y Leu254 (también presentes tanto en la carboxipeptidasa A como en la carboxipeptidasa B) son determinantes estructurales para el reconocimiento de sustratos hidrófobos, mientras que Asp263 lo era para el reconocimiento de sustratos cargados positivamente.Las mutaciones de estos determinantes modifican el perfil del sustrato: la variante CpT Leu211Gln adquiere propiedades similares a la carboxipeptidasa B, y la variante CpT Asp263Asn la selectividad similar a la carboxipeptidasa A.Se demostró que el bucle Pro248-Asp258 que interactúa con Leu254 y Tyr255 es responsable del reconocimiento del residuo C-terminal del sustrato.La unión del sustrato en el subsitio S1' conduce al cambio dependiente del ligando de este bucle, y el movimiento de la cadena lateral de Leu254 induce la reorganización de la conformación del residuo Glu277 crucial para la catálisis.Esta es una nueva visión de la selectividad de sustrato de las metalocarboxipeptidasas que demuestra la importancia de las interacciones entre el subsitio S1' y el centro catalítico.