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1. Estudiamos los efectos inhibitorios de la isorhamnetina sobre la tirosinasa de hongos mediante cinética de inhibición y simulación computacional.La isorhamnetina inhibió reversiblemente la tirosinasa de forma mixta a Ki = 0,235 ± 0,013 mM.Las mediciones de fluorescencia intrínseca y de unión a 1-anilinonaftaleno-8-sulfonato (ANS) mostraron que la isorhamnetina no indujo cambios significativos en la estructura terciaria de la tirosinasa.Para obtener información sobre el proceso de inactivación, la cinética se calculó mediante mediciones de intervalos de tiempo y reacciones de sustrato continuas.Los resultados indicaron que la inactivación inducida por isorhamnetina fue una reacción de primer orden con procesos bifásicos.Para obtener más información, simulamos el acoplamiento entre la tirosinasa y la isorhamnetina.La simulación fue exitosa (energías de unión para Dock6.3: -32,58 kcal/mol, para AutoDock4.2: -5,66 kcal/mol y para Fred2.2: -48,86 kcal/mol), lo que sugiere que la isorhamnetina interactúa con varios residuos, como como HIS244 y MET280.Esta estrategia de predicción de la interacción de la tirosinasa en combinación con la cinética basada en un compuesto de flavanona podría resultar útil en la selección de posibles inhibidores naturales de la tirosinasa.

2. La vía de desarrollo ácido de la conalbúmina (CA), una glicoproteína monomérica de la clara de huevo de gallina, se ha investigado mediante espectroscopía de CD de UV cercano y lejano, emisión de fluorescencia intrínseca, sonda de fluorescencia extrínseca sulfonato de 1-anilino-8-naftaleno (ANS) y dispersión de luz dinámica (DLS).Observamos cambios dependientes del pH en la estructura secundaria y terciaria de CA.Tiene una estructura secundaria α-helicoidal similar a la nativa a pH 4,0, pero pierde estructura a pH 3,0.El CA existía exclusivamente como un estado de glóbulo prefundido y un estado de glóbulo fundido en solución a pH 4,0 y pH 3,0, respectivamente.El efecto del pH sobre la conformación y termoestabilidad de CA apunta hacia su resistencia al calor a pH neutro.Los resultados de DLS muestran que el estado MG existía en forma compacta en soluciones acuosas con radios hidrodinámicos de 4,7 nm.La extinción de la fluorescencia del triptófano por parte de la acrilamida confirmó además la acumulación de un estado intermedio, parcialmente desplegado, entre los estados nativo y desplegado.